轉鐵蛋白是血漿中主要的鐵傳遞蛋白,為細胞分化和細胞代謝提供所需的鐵。研究發現所有的細胞生長都離不開轉鐵蛋白。不但維持正常的細胞代謝依賴于以生物活性形態存在的鐵,鐵還是一些酶的輔助因子,比如 RNA 聚合酶,DNA 合成酶。同時也是血紅蛋白的重要組成部分。
轉鐵蛋白是血漿糖蛋白,從血漿中分離而來,牛轉鐵蛋白以兩種分子形態存在,分子量分別為74KD 和78KD。每個轉鐵蛋白分子通過 C 端和 N 端結構位點可以結合兩分子鐵離子,所以轉鐵蛋白以三種形態存在:脫鐵(不結合鐵離子),飽和鐵(結合兩分子鐵離子)和部分飽和,在生理情況下,轉鐵蛋白分子僅有 1/3 被鐵飽和。
轉鐵蛋白對于絕大部分細胞系在無血清培養基中生長是必需的,研究表明飽和鐵形態的轉鐵蛋白對于促進細胞生長是最有效的形態。對于雜交瘤,黏連細胞和懸浮細胞系,在細胞培養過程中,應保持培養基中轉鐵蛋白濃度在0.5-100μ g/ml。針對不同的細胞系,需要選擇最合適的濃度。
轉鐵蛋白凍干粉需要保存在冷藏狀態下,使用之前再溶解。一般用 PBS 或者其它合適的溶劑在室溫下將轉鐵蛋白凍干粉溶解成儲液,濃度在0.5-2.0mg/ml,然后用無菌濾膜進行過濾,濾液可在無菌條件下2-8℃保存 30 天。
產品質量從源頭開始控制,牛血漿從正規農場定制,進行正規的檢驗檢疫。經過多步色譜純化得到的轉鐵蛋白,需進行60℃,10h 的病毒滅活,然后用 0.1μ m 濾膜過濾。產品最 后要進行包括純度,內毒素,酸堿度,鐵含量,水分,微生物限度等檢查,以確保產品符合細胞培養要求。